Ce qu’un rapport HPLC révèle — et ce qu’il ne révèle pas

Un pourcentage apparaît dans pratiquement tous les rapports d’analyse. Il s’agit de la donnée la plus souvent citée et, en même temps, la plus mal comprise dans ce secteur. Ce texte explique ce qui se cache derrière ce chiffre.

Comment fonctionne la HPLC

La chromatographie liquide à haute performance sépare un mélange en ses différents composants. Ceux-ci passent successivement à travers un détecteur, qui enregistre à chaque fois un signal — visible sur le chromatogramme sous forme de pics. La substance d’intérêt produit généralement le pic le plus important ; les pics adjacents plus petits représentent tout le reste qui a été analysé.

La pureté indiquée est un rapport de surface : le pourcentage du pic de la substance d’intérêt par rapport à la surface totale de tous les pics. « 99,65 % » signifie donc — en termes simples — que 99,65 % de la surface du signal détecté est attribuable à la substance d’intérêt.

Ce que ce chiffre ne dit pas

Trois aspects restent en suspens — et c’est précisément de là que proviennent la plupart des malentendus :

• S’agit-il de la bonne substance ? Un pic élevé ne dit rien sur ce que représente ce pic. C’est la spectrométrie de masse qui répond à cette question.
• Quelle en est la teneur ? La pureté est un rapport, et non une quantité. Un flacon très pur peut néanmoins contenir moins que la quantité déclarée — c’est pourquoi le contenu est déterminé séparément.
• Et ce que le détecteur ne détecte pas ? Un détecteur UV ne détecte que les substances qui absorbent la lumière dans la gamme mesurée. Les sels ou le sucre issus du processus de fabrication n’apparaissent généralement pas dans cette plage : ils ne constituent pas des impuretés au sens strict, mais ne sont pas non plus pris en compte dans le pourcentage.

Pourquoi le numéro de LOT est-il plus important que le pourcentage

Une indication de pureté sans référence au lot est une affirmation relative à une poudre qui a été testée on ne sait quand ni où. Seul le numéro de LOT relie le rapport au flacon que vous avez entre les mains. Vérifiez donc toujours d’abord que le numéro figurant sur l’étiquette correspond à celui indiqué dans le rapport — et seulement ensuite la valeur numérique.